Мерки на претпазливост при електрофореза на полиакриламид гел

· полиакриламидгел мора од акриламид мономер, полимеризација почетен материјал, катализатор, и правото на сол и пуфер мешавина заедно.

· акриламиди BIS (N, N'- метилен двоен акриламид) е гел матрица од мономерна форма.

· амониум персулфат започне лепило полимеризација процес.Формулацијата на лепилото бара 10% раствор на амониум персулфат подготвен во вода.Повеќето информации укажуваат на потреба од активна употреба.Сепак, 10% растворот може да се стави на 4℃ неколку недели без значително губење на активноста.Дополнете до 10 ml и фрлете го кога лепилото нема да се собере.

Совет: Процентот наакриламидво секвенционирање лепак и протеински лепак не е исто.Ако користите претходно направен раствор на акриламид: BIS, погрижете се да го набавите вистинското шише.

· ТЕМЕД (N, N, N', N'- тетраметил етилендиамин) е катализатор, во кафено шише, сместен во фрижидер.Додадете непосредно пред истурање на лепак.

· Електрофореза со полиакриламид, искористеното стакло во електрофорезата треба да се мие пред и после секој пат.По електрофореза, измијте се со мека четка и крпа во топла вода со сапуница, исплакнете со дестилирана вода и оставете да се исуши.

· влага и прашина може да предизвикаат со шуплив полимер.Пред електрофореза, исчистете ја стаклената плоча со средство за чистење стакло и избришете ја со мека четка.Измијте со дестилирана вода и исушете темелно со марамче.Плакнењето со 70% етанол пред бришење со хартија помага да се исчисти и забрза сушењето.Додадете примероци од акриламид последователно: BIS, вода, пуфер раствор, амониум персулфат, ТЕМЕД.Добро протресете и истурете веднаш.

Не е неопходно да се дегазира полиакриламид пред полимеризација.(Акриламидот порано се ставаше во вакуум за да се отстранат меурите бидејќи кислородот ја инхибира полимеризацијата.)

Совети за примерок од хоризонтална точка на лепак.

· Ставете парче црна хартија во долната кутија, црна позадина за да направите дупка за примерок за појасно да се види.
· тампон исполнет со резервоар за лепак, веднаш над колоидот.
· ако работ има светло, вклучете ги светлата, нека светлината свети колоидно.Нацртајте го примерокот во пипетата.
· користење автоматско пипетирање уред.
· во 10-200 mu 1 течна подвижна точка може да се користи во повеќето точки на примерокот.За многу мали дупки за примероци (помалку од 10μ1), попогодна е долгата глава на пипета што се користи за секвенционирање на лепак.

· пипетирање штотуку потопено во примерокот, вдишувајќи бавно подвижна течност.Примерокот може да изгледа леплив со глицерин, а брзото пумпање може да повлече воздушни меури во главата на пипетата.

· примероците по вдишувањето на главата за пипетирање, нежно ќе ја поместат главата на течноста на работ на цевката или ќе ја бришеат течната глава надвор од капките.Внимавајте да не го цицате примерокот.

Ставете го примерокот во дупката за примерок

· Пипетирање уред за да се задржи мал притисок, направете ги примероците малку да се поместуваат преливната течна глава.
· Главата за пипетирање вметната во тампонот, малку повисока од дупките на место, одржува позитивен притисок.Врвот на пипетата може да се вметне во мала дупка.
· полека и стабилно се исфрлаат примероците.Врвот на пипетата е поставен над дупката за примерок од точка, а примерокот ќе потоне во дупката.Оставете го примерокот да потоне за да ја пополни дупката за примерокот наместо да туркате внатре.
· штом последната капка примерок со течна глава, течноста ќе се премести на вториот крак, полека подигнете ја течноста поместете се, излезете од тампон

Како да направите вертикално земање примероци од лепак?

· вертикални дупки за примерок за лепак, формирани помеѓу две парчиња стакло.Во многу тенок лепак, главата на пипетата не може ни да се вметне помеѓу две стаклени плочи.Внимавајте на глицеринот!Ставете ја главата на пипетата над дупката за примерокот и примерокот ќе потоне во дупката.
· точка примерок пред, не заборавајте да се стави вертикална точка на полипропилен ацил гел примерок дупка е исплакнат чист.Измијте го неполимеризираниот акриламид и водата што може да се појави на дното на дупката за примерокот.Водата може да ја направи дупката за примерокот значително помала.Користете шприц од 25 мл или 50 мл и игла со големина од 18.Истурете го пуферот за електрофореза и внимателно исплакнете ја дупката за примерокот.
· може да биде тешко да се види дупката за примерокот, но во исто време, остатокот е лесен.Ако има вишок дупки, пуферот на примерокот може да се тестира со бромофенол сино.