Мерки на претпазливост за електрофореза со полиакриламид гел

· полиакриламидотГелот мора да биде составен од акриламид мономер, почетен материјал за полимеризација, катализатор и десно од сол и пуферска смеса заедно.

· акриламиди BIS (N, N'-метилен двоен акриламид) е мономерна гел матрица.

· амониум персулфат го започнува процесот на полимеризација на лепилото. Формулацијата на лепилото бара 10% раствор на амониум персулфат подготвен во вода. Повеќето од информациите укажуваат на потреба од активна употреба. Сепак, растворот од 10% може да се чува на 4℃ неколку недели без значително губење на активноста. Дополнете до 10 ml и фрлете го кога лепилото не може да се агрегира.

Совет: Процентот наакриламидпри секвенционирање, лепилото и протеинското лепило не се исти. Ако користите претходно направен раствор од акриламид:BIS, осигурајте се дека сте го набавиле вистинското шише.

· TEMED (N, N, N', N'-тетраметил етилендиамин) е катализатор, во кафеаво шише, ставено во фрижидер. Додадете непосредно пред да истурите лепак.

· полиакриламидна електрофореза стаклото што се користи во електрофорезата треба да се мие пред и по секој пат. По електрофорезата, измијте го со мека четка и крпа во топла вода со сапуница, исплакнете со дестилирана вода и оставете да се исуши.

· Влага и прашина може да предизвика шупливиот полимер. Пред електрофореза, исчистете ја стаклената плоча со средство за чистење стакло и избришете ја со мека четка. Измијте со дестилирана вода и темелно исушете ја со хартиена крпа. Исплакнете со 70% етанол пред бришењето со хартија за чистење и забрзување на сушењето. Додадете примероци од акриламид последователно: BIS, вода, пуферски раствор, амониум персулфат, TEMED. Добро протресете и веднаш истурете.

Не е потребно полиакриламидот да се дегазира пред полимеризација. (Акриламидот порано се ставал во вакуум за отстранување на меурчиња бидејќи кислородот ја инхибира полимеризацијата.)

Пример за врвови за хоризонтални точки за лепење.

· ставете парче црна хартија во долната кутија, со црна позадина за да направите дупка за примерок за да гледате појасно.
· резервоарот за лепак е исполнет со тампон, веднаш над колоидот.
· ако работ свети, вклучете ги светлата, оставете колоидна светлина. Навлечете го примерокот во пипетата.
· користење на уред за автоматско пипетирање.
· во 10-200 mu 1 точка на движење на течноста може да се користи во повеќето точки на примерокот. За многу мали дупки во примерокот (помали од 10μ1), долгата глава на пипетата што се користи за лепило за секвенционирање е попогодна.

· пипетирање само потопено во примерокот, вдишувајќи бавно движечка течност. Примерокот може да изгледа леплив со глицерин, а брзото пумпање може да повлече воздушни меурчиња во главата на пипетата.

· примероците по вдишувањето на главата на пипетата, нежно ќе ја поместат главата на течноста по работ на цевката или бришејќи хартија, ќе ја вшмукаат главата на течноста надвор од капките. Внимавајте да не го вшмукате примерокот.

Ставете го примерокот во дупката за примерок

· уред за пипетирање за да се одржи мал притисок, да се направи примероците малку да се поместуваат преливната течност.
· главата на пипетата вметната во пуферот, малку повисоко од дупките за точка, одржува позитивен притисок. Врвот на пипетата може да се вметне во мала дупка.
· полека и стабилно извадете ги примероците. Врвот на пипетата е поставен над точката на отворот за примерокот, а примерокот ќе потоне во отворот. Оставете примерокот да потоне за да се пополни отворот за примерокот, наместо да го туркате навнатре.
· откако последната капка од примерокот ќе се истури со течна глава, течноста ќе се движи кон втората нога, полека кревајќи ја течноста, поместувајќи ја надвор од тампонот

Како да се направи вертикално земање примероци од лепак?

· вертикални дупки за примероци на точките за лепење формирани помеѓу две парчиња стакло. Кај многу тенко лепило, главата на пипетата не може ниту да се вметне помеѓу две стаклени плочи. Внимавајте на глицеринот! Ставете ја главата на пипетата над дупката за примерокот и примерокот ќе потоне во дупката.
· Пред да го ставите примерокот на вертикалната точка, проверете дали дупката за примерок е исплакната на полипропилен ацил гел. Измијте го неполимеризираниот акриламид и водата што може да се појави на дното од дупката за примерок. Водата може значително да ја намали дупката за примерок. Користете шприц од 25 ml или 50 ml и игла со калибар 18. Истурете го пуферот за електрофореза и внимателно исплакнете ја дупката за примерок.
· може да биде тешко да се види дупката на примерокот, но во исто време, останатото е лесно. Доколку има вишок дупки, пуферот за примероци може да се тестира со бромофенол сино.